Eisenhämatoxylin nach Heidenhain

Mikroskopische Färbemethoden Botanik / Zoologie

Benötigte Chemikalien :
Eisenammoniumalaun, Hämatoxylin (C.I.75290), Ethanol 96%ig, Xylol, Eisessig, Schwefelsäure 10%ig, Natriumjodat, Natriumhydrogencarbonat

Bemerkung :
Gegen Schluß der Differenzierung kann eine verdünnte Alaunlösg. zum Verlangsamen des Differenzierungsprozesses angebracht sein.

Literatur :
HistTech S.106 / MT68 §663 / BoMT S.113

Arbeitsablauf : zoologische Objekte

Beizen in Alaunbeize 3 Std. bis 1 Tag.

Hämatoxylinlösung 1:1 mit Aqua dest. verdünnt. 1 Std. bis 2 Tage.

Differenzieren in Alaunlösung unter Mikroskopkontrolle.

Wässern in fließendem Wasser

Entwässern, Xylol, Balsam;

Ergebnis :
Darstellung von Tonofibrillen, Gliafasern, Kernteilungsfiguren, Mitochondrien und Markscheiden.

Arbeitsablauf : botanische Objekte

Objekte gründlich mit Aqua dest. spülen.

Alaunbeize (meristematische Gewebe, Chromosomenuntersuchung 2 Std., Algen 30 Min., Pilze 12Std.)

Hämatoxylinlösung + Aqua dest. 1:1 (höhere Pflanzen 2-5 Std., Pilze und Flechten 12-48 Std.)

gründlich mit Aqua dest. spülen.

Differenzieren in Alaunlösung unter Mikroskopkontrolle.

Wässern in fließendem Wasser (Bläuen), evtl. etwas Natriumhydrogencarbonat zusetzen.

Entwässern, Intermedium, Einschluß

Ergebnis :
Chromatin, Chromosomen, Mitochondrien, Proplastiden, Pilzmycelien schwarz, blauschwarz oder dunkelgrau,
Cytoplasma leicht grau oder gelblich.

Ansätze :

Hämatoxylinlösung (klassische Methode) :
0.5g Hämatoxylin in 10ml Ethanol 96%ig lösen und dann mit 90ml Aqua dest. verdünnen. Danach 4 Wochen unter Luftzutritt reifen lassen.

Hämatoxylinlösung (künstl. Reifung) :
0.5g Hämatoxylin in 10ml Ethanol 96%ig lösen und dann mit 90ml Aqua dest. verdünnen. Danach mit 0.1g Natriumjodat versetzen. Die Lösung ist sofort gebrauchsfertig.

Alaunbeize :
4g Eisenammoniumalaun in 96ml Aqua dest. lösen, mit 1ml Eisessig und 1.2ml 10%iger Schwefelsäure versetzen. Die Beize ist monatelang haltbar.

Alaunlösung :
2.5g Eisenammoniumalaun in 97.5ml Aqua dest. lösen. 1 - 2 Wochen haltbar.

In den meisten Vorschriften wird für die Beize eine 2,5%ige wäßrige Lösung von Eisenammoniumalaun angegeben. Es dürfen dabei nur solche Alaunkristalle verwendet werden, die blaßviolett gefärbt sind und keine rostroten Stellen aufweisen. Diese einfache Alaunlösung ist jedoch nur 1 bis 2 Wochen haltbar. Die angegebene Alaunbeize hält sich dagegen monatelang und führt auch meist zu klareren Färbungen.